יישום אקדח ג'ין בפיתוח פרי

דובדבן הוא פרי שתלוי יחסית באקלים. במהלך התפתחות הפרי, התבגרותו מווסתת על ידי חומצה אבסיסית (ABA).

במחקר זה, נעשה שימוש בשיטת השתקת גנים (VIGS) ושיטת הפצצת חלקיקים על מנת לזהות ארבעה cDNA שקודדים 8'-הידרוקסילאז (אנזים מפתח לקטבוליזם חמצוני של ABA) בפירות דובדבן מתוק. חומצה Deoxyribonucleic) Paccyp707a1-a4

Paccyp707a2 מווסת שלילית את ההבשלה של פרי הדובדבן, וה paccyp707a1 מתווך לסובלנות לבצורת

השתקת גנים הנגרמת על ידי וירוסים (VIGS) מתייחסת לנגיף המדביק צמח הנושא שבר של גן מטרה, שיכול לגרום להשתקת גנים אנדוגניים, לגרום לשינויים פנוטיפיים ולאחר מכן לחקור את תפקודו של גן המטרה על בסיס שונות פנוטיפית.

איור 1 באיור 1. שינויים בסינתזת הביולוגיה של ABA (pacnced1), קטבוליזם של ABA (paccyp707as) וגנים הקשורים לתוכן ABA במהלך התפתחות והתבגרות של פרי דובדבן מתוק. (א) רמות תמלול מוחלטות של ארבע pacyp707as במהלך התפתחות פרי. (ב) רמות תמלול יחסית שנצברו על ידי pcnced1 ו- aba במהלך ההתפתחות. האקטין שימש כבקרה פנימית וביטויו התגלה על ידי qrt-pcr.

ביטוי של הגן pAccyp707a בתגובת התייבשות

הפירות שנאספו מ- 32 יום חולקו לשתי קבוצות, ושיעור איבוד המים היה 16% ב 45% לחות יחסית לאחר אחסון במשך 3 ימים בתנאים של לחות יחסית נמוכה (45%) ולחות יחסית גבוהה (100%). תכולת ABA ורמת התמלול של pNCED1 בפירות היו גבוהים משמעותית מאלו בקבוצת הביקורת. הוא שולט (איור 2). לעומת זאת, הביטוי של Paccyp707a1 הוסדר באופן משמעותי למטה לאחר התייבשות, והביטוי של Paccyp707a3 הוסדר גם הוא למטה, אם כי במידה פחותה, והביטוי של Paccyp707a4 ו- Paccyp707a2 לא הושפע מהתייבשות (איור 2). השינוי המשמעותי ביותר התרחש בביטוי של paccyp707a1, שהוא אולי החשוב העיקרי לתגובת הבצורת במשפחת הגנים paccyp707a במהלך הבשלת הפירות.

השתקת גנים של Paccyp707A2 מעודדת צבעי פרי והתבגרות

הפנוטיפ של הפרי טופל באמצעות Paccyp707A1 / 2-RNAi. ביום ה -28 לאחר הפריחה, נבחרו 90 פירות משלושה עצי דובדבן הנטועים בפרדסים נפרדים, וחולקו לשלוש קבוצות של 30 כל אחת לצורך ניסויים להשתקת גנים הנגרמים.

Paccyp707a1-rnai, paccyp707a2-rnai והווקטור trv שליטה (ללא גן cyp707a) הוזרקו לפדיקלים של פירות הקבוצות 1, 2 ו- 3, בהתאמה.

הפרי הוערך 7 ימים לאחר החיסון.

(א) טיפול בפירות (ד) 28 יום לאחר הפריחה;

(ב) 43 ד לטיפול בפרי;

(ג) טיפול וקטורי ב- trd 43d בפירות (ללא גן cyp707a);

(ד) 43 ד 'של פרי שטופלו ב- RNAi ב- pacyp707a1;

(ה) טיפול RNAi paccyp707a2 בפירות;

(ו) פירות שטופלו ב- Paccyp707a2 RNAi 6 ימים לאחר הטיפול (בקרה ימנית);

(ז) paccyp707a1 RNAi 6 ימים לאחר הטיפול בפירות (פיקוח על מימין).