כיצד להשתמש באקדח גן

1. הכנה חומרית

שכבה דקה של מדיום הונחה על צלחת של 9 ס"מ, והחומר (בדרך כלל עוברים לא בוגרים, עוברים בוגרים, קאלוס קטן, תאים מתלים, פרוטופלאסטים וכו ') היה מצופה במרכז הצלחת בקוטר של 3 ס"מ .

2, את הטיפול של אבקת זהב

קח 60mg אבקת זהב או אבקת טונגסטן בצינור צנטריפוגה, להוסיף אתנול 1ml מוחלטת, לנער היטב עבור 3min, צנטריפוגות עבור 1rain ב 9615g, להסיר את supernatant, להוסיף 1ml של מים סטריליים ומערבבים היטב, צנטריפוגה ב 9615g, חזור על שלב 3 לעיל. טיימס. לבסוף, אבקת זהב היה מושעה 1 מ"ל של מים מזוקקים סטריליים מאוחסן ב 4 'C או בטמפרטורת החדר.

3, עיבוד DNA

קח 50tA אבקת זהב השעיה, להוסיף DNA פלסמיד 5 (1.0 / lg ~ 1) פתרון, 50 / l

0.1 mol / L spermidine (הפתרון היה סטרילי סטריליזציה), מזועזע במשך 3 דקות, נותר בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות, centrifuged ב 9615 גרם במשך 10 שניות, להשליך supernatant; הוסף 250 ~ 1 אתנול מוחלט, לנער לצנטריפוגה ב 9615 גרם במשך 10 שניות וזורקים את supernatant. גלולה היה resuspended ב 60/1 1 של אתנול מוחלט המשמש 5 יריות (10 ל 1 לכל זריקה).

4, הפעולה של האקדח הגן

כל הפעולות של האקדח הגן מבוצעות בתנאים aseptic, כדלקמן:

1) לחטא את פני השטח של האקדח הגן ואת תא המדגם עם אתנול 70%. במקביל, המכשול נטו ואת הדיסק מחודד, נושאת מיקרו אלסטית, מחזיק שלה כלי תיקון היו רטובים במשך 15 דקות עם אתנול 70%, ולאחר מכן הניח על ספסל נקי לייבוש. הדיאפרגמה המפוצלת, הכיסוי הקבוע, והמכשיר המשולב אלסטי, יכולים להיות מעוקרים על פני השטח עם אתנול 70% ויבש.

2) הכנס את השקופית microparticle לתוך טבעת שמירה, ולהוסיף תערובת של DNA ואבקת זהב למרכז השקופית microparticle ויבש במשך כ 1 דקות.

3) להתקין את הממברנה rupturable על המחזיק שלה ולהפוך אותו בכיוון השעון על מאיץ הגז.

4) התקן את טבעת החלל, את רשת החסימה, את מחזיק הרשת החוסמת, את מחזיק החלקיקים ואת טבעת התיקון (הפנים עם החלקיקים הפונים כלפי מטה), הידוק הכיסוי והכנס אותו לתפס.

5) מניחים את המדגם בתא הפצצה וסוגר את הדלת.

6) פתח את השסתום הראשי של גליל הליום ולהפוך את שסתום הליום הווסת בכיוון השעון, כך אינדיקציה של מצביע מד הלחץ גבוה יותר מאשר הלחץ הסרעפת 200Psi (= 1.379MPa).

7) הפעל את האקדח הגן בורר שנאי.

8) לחץ על לחצן ואקום. כאשר הריק הוא 26-28 ב Hg (= 88.05 ~ 94.82kPa), לחץ על לחצן החזק במהירות ולאחר מכן לחץ והחזק את לחצן ההשקה ושמור אותו עד להופעתו.

) 9 לחצו על מקש האוורור כדי לאפס את הדגימה לאחר טבלת האבק.

10) כבה.

הדקו את המתג הראשי של גליל הליום, פגעו באקדח ריק, החזירו את מצביע מד הלחץ לאפס, ולאחר מכן סובבו את שסתום כוונון הלחץ בלחץ נגד כיוון השעון; לכבות את המתג הראשי של האקדח הגן בורר שנאי.